细胞平台净化室操作规程_XBGL.20.018.140320

1 适用范围

Ø 所有科研人员及管理人员

2 生效日期

Ø 本SOP文件自2014年3月20日生效，原SOP文件《70.010.02.细胞室培养间操作规程》停止执行。

3 目的

Ø 规范细胞平台净化室操作规程

4 职责

Ø 科研人员：认真执行本SOP的内容，并作好相关记录。

Ø 管理人员：培训、指导科研人员正确执行本SOP。

5 内容

5.1 科研人员进入细胞平台开展实验应该遵循净化室的进入程序和退出程序。

Ø 进入程序：登记，将拟带入细胞净化室的物品置入传递窗内、开启紫外灯并关闭窗门；洗手，关层流室紫外灯、开照明灯，换鞋，确认层流已开启；酒精棉球擦拭双手，更换衣帽、口罩后，方可通过风淋室→缓冲间→进入细胞操作室→实验。

Ø 退出程序：实验结束后，清洁和整理实验室及台面；使用生物安全柜后，需保持运行10min以上，开启柜内紫外灯30min；确认实验仪器设备处理无误(如生物安全柜、显微镜等已关闭)，关闭照明灯；将要带出的物品置入污物传递窗内、开启紫外灯并关闭窗门；通过风淋室→更衣室（更换并放好衣帽、口罩、拖鞋）→出净化室（请务必随手关门）→登记结束时间→整理废弃物及回收物品，离开。

Ø 下班时间段（12:00、18:00、22:00）最后一个离开净化室的科研人员需关闭空调机、层流组开关，关闭照明灯开关，不得随意关闭其它开关(包括风淋室开关、电源总闸、插座开关等)，再打开紫外灯开关，定时到1小时。

5.2 紫外灭菌灯使用

Ø 净化室紫外灯每天由最后离开净化室的科研人员开启定时开关，定时1h，其他时间原则上不再开启。

Ø 特定时间段(即下班时间如12:00、18:00、22:00左右)，科研人员可以根据具体情况酌情开启。开启时请一定确认是在无人情况下。

Ø 入室前一定确认紫外定时灯是否已关闭，避免在紫外开启状态下误入，造成人体伤害。

Ø 紫外灯开启的前提必须是层流处于关闭状态。

Ø 紫外灯消毒期间，请勿进入净化室。

5.3 细胞净化室层流、空调系统使用规程

Ø 层流及空调为2组，组间更换由管理人员进行。

Ø 层流每天定时7:30开启，23:00定时关闭。特定时间段即下班时间如12:00、18:00、22:00左右，最后一个离开实验室的科研人员，在确认无人在下一时段使用时，请关闭层流开关。

Ø 进入净化室时，请确认层流开关已开启，特别是第一个进入人员。

Ø 开启、关闭层流开关时请仔细辨别面板上的字样，避免操作重复造成错误，致使层流频繁开关造成损害。

5.4 传递窗使用

Ø 传递窗口分为两类，普通传递窗及专用传递窗；普通传递窗分为污物传递窗和洁净传递窗；灭菌后的物品请从洁净传递窗传递，未灭菌及回收物品请走污物传递窗。

Ø 传递窗设计为双门互锁设置，不能两面同时打开，否则会造成无法正常关闭，且影响实验室的洁净环境。

Ø 传递窗有紫外灯，使用时请酌情开启。

Ø 临床标本传递窗供临床标本及动物操作时使用，污物进出时请采用紫外灭菌的方式消毒处理。

Ø 传递窗开启时，注意窗内紫外灯应关闭。实验物品的带入应通过传递窗，药品试剂、灭菌物品及实验器材从灭菌物品通道通过，报告册，废液缸及一些私人物品则放在污物通道。

5.5 上岗证的佩戴：科研人员培训合格后由科研中心在胸牌上签章获得上岗权限。每次入室，所有人员需要穿白大褂，佩戴准入证；离开实验室将证件挂回原处。进入细胞净化室，将准入证存放于细胞室外的胸牌存放处；离开时，请取走胸牌。科研人员可以通过胸牌判定实验室在用状态，以便进行关闭层流、开启紫外的操作。

5.6 进净化室必须先换室内消毒过的鞋或鞋套，在更衣室中先用酒精消毒棉球擦拭双手后，穿无菌衣，戴无菌帽及口罩，再用酒精消毒棉球擦拭双手，进入实验室。

5.7 无菌衣和帽子由准备室管理员统一更换。

5.8 在风淋室感应吹风，其停留时间需大于10秒后才能进入操作室。严禁随意关闭、调整风机设置。

5.9 请不要在传递窗内长期存放物品。

5.10 认真做好各项实验，严格进行无菌操作，各种实验物品按指定地点存放，使用后的吸管、枪头及培养瓶等回收物品清洗后集中高压灭菌处理，参见《细胞平台废弃及回收物品处理操作规程》。

5.11 对于在实验室的一切消耗品应本着节约的原则，使用后的物品归放原处。

5.12 爱护室内仪器设备，按操作规程操作，不得随意拨动电器开关；使用显微镜需登记，使用完后功能部件需复位；实验中发生意外事故或仪器故障时，应立即报告及时处理，切勿隐瞒或自作主张、不按规定处理，并如实填写《表C1-d2：细胞平台故障登记》。

5.13 实验完毕后整理操作区，用消毒酒精擦拭台面；需培养的材料要标记名称，操作者姓名、日期等方能放入培养箱，出实验室前注意关闭生物安全柜、照明灯，在更衣间按照要求关层流开关，开启紫外灯。

5.14 实验室安全程度达二级生物安全实验室标准，原则上不接受涉及生物安全防护级别高于BSL-2的致病微生物如细菌、病毒、支原体、立克次体等的课题。

5.15 科研人员在进入细胞净化室之前和使用结束后，需在《表C1-d9：细胞平台预约登记表》中记录使用时间，并严格遵守《细胞平台预约登记制度》。如需同时使用同一操作台，请与先登记者联系，以取得同意。

5.16 科研人员联系方式见《细胞平台科研人员联系方式一览表》。

5.17 安全柜分为专用和普通生物安全柜。

Ø 普通生物安全柜编号分别为A1/A2，B1/B2，C1/C2，D1/D2，E1。

Ø 专用生物安全柜编号为F1/F2和E2。

Ø E2专用于动物原代及常规、无特殊要求的临床标本。

Ø F1/F2专用于有特殊要求的临床标本原代操作（需申请及签订使用承诺书）。

Ø 动物原代不能在F1/F2组中操作，只能用E2安全柜。

5.18 入室通道分物流通道和人流通道。物流通道为公用灭菌物品、液氮、仪器运输专用。人流通道即经更衣室、风淋室、缓冲走廊，进入净化室。严禁操作人员经物流通道直接进入净化室。

5.19 动物实验要求

Ø 因本室无菌程度要求较高，故建议细胞室使用的动物为SPF级，如遇特殊情况请联系管理人员。

Ø SPF级动物入室前需致死，并用75%的酒精浸泡5mim以上方可带入。如有特殊前处理请在SPF动物中心处理后在带入细胞室。

Ø 动物标本进出请使用临床标本室专用传递窗，标本及污物进出时请采用紫外灭菌处理。

Ø 废弃物及动物尸体处理严格遵循实验室废弃物处理SOP。

5.20 临床标本使用原则

Ø 使用临床标本请如实填写《临床标本使用登记表》。

Ø 临床标本使用请严格遵循临床标本使用条例。

Ø 临床标本来源清楚。

Ø 临床废弃物及标本处理请严格遵照临床废弃物标本处理方案。

Ø 操作临床标本请在专用安全柜。

Ø 其细胞在3-5天后或第一次传代后可酒精擦拭后转入普通培养箱及在普通生物安全柜内操作。

Ø 临床标本传递窗供临床标本时操作使用，标本及污物进出时请采用紫外灭菌处理。