一．Agilent 1260的使用流程
1 材料与试剂
仪器：安捷伦1260型液相色谱仪
色谱柱：
流动相配置：乙腈/水分别用有机/水系滤膜在溶剂过滤装置中过滤三遍，试剂瓶用过滤后的液体润洗后装入流动相，拧松盖子，超声30min至液体无气泡。
标准品配置：精密称量2.00mg雷帕霉素，乙腈定容于10mL容量瓶中，用0.22μm有机系滤膜过滤0.5mL到进样瓶中，润洗进样瓶后，再过滤1mL装入进样瓶中，备用。
2操作方法
2.1 开机准备：
①启动计算机：打开计算机电源（密码为trpt），登陆windows操作系统。
②启动液相：打开Agilent 1260各模块电源（包括四元泵、进样器、柱温箱、检测器，做分析可以不开馏分收集器）。待Agilent 1260各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，双击“1260（联机）”图标，打开软件，软件用户名为“admin”，密码为“trptzb”
③开启工作站：工作站打开，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”。打开仪器控制视图：选择“视图→系统视图”，即可显示仪器控制视图，选择“视图→样品视图”，即可显示样品信息视图。
④流动相：将四元泵装入流动相中。其中A泵为纯水，B泵为纯水+0.1%TFA，C泵为乙腈+0.1%TFA，D泵为乙腈。设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上单击鼠标左键，点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积。在溶剂瓶图形上单击鼠标右键，点击“方法”，设置流动相比例与流速。
⑤冲洗流动相管路：旋开溶液排空阀，设置流速为5mL/min，冲洗通道，底部排液管连接废液瓶，冲洗管路中气泡直至排空。
2.2 仪器运行
①安装色谱柱：打开柱温箱，拧开色谱柱一端，与柱温箱连接好后拧开另一端，安装原则为右进左出，安装好后关闭柱温箱盖子。
②平衡色谱柱、进样分析：降低泵流量为0.2mL/min，流动相比例为乙腈：水=75:25.关闭溶液排空阀，待流动相流入色谱柱后流出，缓慢增加流量为0.4mL/min→0.6mL/min→0.8mL/min→1mL/min（流量从小到大，以防流速过快冲塌柱子）。设置压力限“上/下限”是最大/小压力限制，达到“上限”或者“下限”值时，泵将自动关闭，从而防止分析系统压力超限。设置泵上限为200 bar，下限为0 bar。监视压力基线等待平稳后（约30min），可以进样采集分析。
③监视基线：点击按钮或者“视图→在线信号”打开“在线图谱”。点击“改变”按钮，选择“可选信号”中需要监视的信号，“添加”到“选定信号中”。调整“窗口”中“X周范围”，如需要画“0”点基线，请选择“画零线”。调整Y轴“Y轴范围”与“偏移量”或者选择“Y轴自动调整”来选择合适的监视图形。
④单次进样：右击各窗口，点击“方法”
，进样器设置进样体积为10μL；四元泵设置流动相比例，停止时间。柱温左右各40℃，设置样品位置A1与名称“XX 200μg/mL”,开启检测器紫外灯。点击“单次进样窗口”，设置本次进样的保存路径和名称。设置好后点击开始，待仪器元件全部处于空闲状态后，点击“单次进样”，系统开始运行。
⑤序列进样：利用自动进样器自动批量进样
，选择“序列→序列参数”；选择“序列→序列表”，样品瓶---填写样品瓶位置；样品名称---填写样品名称；方法名称---点击，出现下拉框，选择方法；进样次数/瓶---填写每个样品瓶进样次数；样品类型---选择样品类型：样品，标准样品、控制样品(一般选样品)；校正级别---在选择标准样品后，填写此瓶标准样品的校正级别；进样量---如空缺则为自动进样器设置进样量；确定---保存样品信息，后“运行控制->运行序列”。保存序列模板：选择“序列->保存序列模板/序列模板另存”
⑥数据采集：待本次运行结束后，点击“停止”，点击“数据处理”→“报告”
选择“性能报告”，点击打印至电脑，即可得到本次数据的PDF文档。
2.3 关机
①关闭检测器的灯：在软件界面MWD中右击，关闭检测器的灯后冲洗系统30min，可以延长检测器灯的寿命。
②冲洗系统：
a.没有盐缓冲溶液的流动相：（反相系统）用85%~90%有机相+15%~10%水相冲洗系统和反相色谱柱或者适宜的流动相冲洗系统和反相色谱柱；
b.有盐缓冲溶液的流动相，（反相系统）用85%~90%水相+15%~10%有机相冲洗系统和反相色谱柱（反相系统），除去反相色谱柱与系统中的盐溶液。然后用85%~90%有机相+15%~10%水相冲洗系统和反相色谱柱。
③封存色谱柱：（反相系统）用90%~95%有机相+10%~5%水相封存反相色谱柱，取下色谱柱，两端封死。（如长时间存放可将柱子完全浸泡有机相内，以防长期保存有机相挥发）。
④关闭电脑：将泵流速逐步降至0mLmin，单击“关闭”按钮关闭所有模块，退出化学工作站，关闭电脑。
⑤关闭模块：关闭所有模块电源开关。
注意：仪器运行过程中各模块均显示“错误”(红色指示灯)，可能是漏液/柱压过高，需检测整个系统的漏液或堵塞情况。
