1               适用范围：

本SOP适用于Leica CM1950冷冻切片机的使用及维护。

2               职责

Ø  冰冻切片机操作人员：认真执行本SOP的内容，并作好相关记录。

Ø  设备管理员：培训、指导操作人员正确执行本SOP。

3               技术参数：

Ø  箱体制冷温度        最低可达-18至-35℃

Ø  制 冷 点            24个，通过冷凝管制冷，最低可达-50℃

Ø  选配：极速冷冻单元，增加5个制冷点，可达-60℃（本仪器无极速冷冻单元）

Ø  切割厚度            1μm～100μm

Ø  水平行程            25mm+1mm

Ø  垂直行程            59 mm+0.5mm

Ø  最大样品尺寸          50X80mm

Ø  样本头调向            X和Y轴：±8°                  

Ø  切片速度          慢速：0-50张/分钟

                  快速：0-85张/分钟

                  最大速度：85-90张/分钟

Ø  粗修              慢速：300um/每秒

                  快速：900 um/每秒

4               应用范围

Ø  主要应用于各种组织的冰冻切片。

Ø  各种类型的组织需要不同的温度,如下表所示：

组织类型	温度°C(刀边缘)	组织类型	温度°C(刀边缘)
骨髓	-16～-25	肺	-13～-20
大脑	-10～-15	淋巴节	-13～-20
带有脂肪的大脑	-25～-30	淋巴腺	-13～-20
大脑(无脂肪)	-16～-20	淋巴	-13～-20
软骨	-13～-20	肌肉	-13～-20
脂肪	-30～-40	鼻子	-13～-20
心脏	-20～-20	直肠	-16～-20
肠	-13～-20	脾	-15～-20
肾	-13～-20	皮肤(脂肪)	-16～-20
肝	-10～-20	皮肤(没有脂肪)	-10～-16

5               仪器设置

 

5.1     开机：如果使用处于关机状态，必须提前5小时打开仪器右侧的主机开关，,然后设定温度等参数。

注：冷冻切片机处于冷冻室-15至-20度开机状态，样品头制冷即用即开，用完后及时关闭。

5.2          时间设置：

可用标有时钟图标的控制面板的+/-按钮设置时钟时间。

 

机箱温度设置：

 

 

 

 

设定冷冻箱的温度：冷冻箱温度在标有切片机图标的控制面板上设置和显示。

实际温度是标准读数。短暂按下‘+’或‘-’按钮，将显示目标温度。用‘+’/‘-’按钮设置目标值。

 

5.3           样本头温度设置：

 设定样品温度：在冷冻箱温度达到-20度后再设置样品头温度；选择所需样品的温度，样品温度在标有样品图标的控制面板上设置和显示。

5.4           样品温度-最冷功能：

 启用‘最冷’功能的雪花按钮在样品温度区域中。

按下“雪花”按钮，将样品头可达到的最低温度（-50°C）设为目标温度。仪器便会调整样品头最低温度，即 -50°C。再次按下雪花按钮，停止最冷功能，温度将调整至启动“最冷”功能前的设定值。

当“LL”和实际温度交替闪烁时，表明“最冷”功能已启动。

5.5          设定除霜周期：

 设置自动除霜周期的开始时间：每24小时进行一次自动除霜过程。用带有时钟图标的面板右侧的“+”/“-”按钮设置，两个按钮以一朵正在融化的雪花为标记。

 短暂按下“+”或“-”按钮将显示实际设置的除霜周期开始时间。同时，小时和分钟读数间的LED闪烁。

如果要以15分钟的间隔更改为除霜周期的开始时间，请按下“+”或“-”。按住“+”或“-”键超过1秒，除霜时间值将连续增加或减少。（注：除霜周期启动前，务必取出冷冻箱中的所有样品）

自动除霜周期开始时，样品头温度将调整到-10°C至-5°C之间（减少结冰）。

速冻架手动除霜：

 

 

 

 

 冷冻箱手动除霜：

样品头制冷系统手动除霜：

 

5.6          切片厚度设置：

 

 

6               使用预冷过的冷冻切片机：

6.1          准备工作

 

7                样品的安装及样本头方向调节

长时间使用后，样品头可能会松动，导致切片时出现缺陷。此时必须进行简单的重新调节。

为避免受伤，调节锲形榫头导轨之前需要拆除刀架。将刀架放入冷冻室，防止其变热，这样就可在调节完后立即重新使用。

注：每次将样品头锁入到位后，都必须检查样品头是否稳固。

注：新切片刀初次使用前，先用丙酮或酒精清除油脂。

 

Ø  将切片废屑滤网装好后放入抽吸孔，安装到位    

8               刀片的安装                              

Ø  先将切片手轮锁在12点位置；

Ø  新的刀片使用之前，先用酒精去除刀片上的油脂；

Ø  刀片在切片前需要提前预冷；

Ø  打开刀片固定基座的手柄，将刀片放入卡槽之后，立即将手柄锁紧。                                     

8.1          刀片底座方向的调节

    打开刀片底座固定手柄，将刀片底座移动到合适的位置锁紧手柄。

8.2          刀片固定基座的调节：

第一，  打开刀片固定基座的固定手柄；

第二，  上下移动基座，移动到合适位置以后锁好手柄。

 

9               样品修块程序

首先设置好修块厚度，打开冷冻切片机切片手柄，调节手轮,确保样品头能够安全上下的移动；然后再进行样品修整。

10            切片程序：

首先设置好切片厚度（切片厚度设置范围：0-30um），打开冷冻切片机切片手柄，调节手轮,确保样品头能够安全上下的移动；最后进行切片、贴片。

 

11     注意事项及维护保养

1)      该仪器必须在获得授权后方可使用，使用前提前1-2天QQ群内预约；

2)      使用前先检查登记本记录是否有问题；

3)      检查切片残渣滤网是否安装好，切片手轮是否已锁定；

4)      在使用过程中，仪器两侧严禁站人，以免误压按钮造成切片故障；

5)      冷冻室的玻璃盖严禁重压和重物撞击，使用后务必及时关闭玻璃门盖；冷冻室玻璃门不用时必须处于关闭状态。

6)      切片机冷冻室温度平时不用时应处于-18度，使用时在调至需要温度。

7)      冷冻切片机的样本头温度必须即用即开，提前3-5分钟开启即可，用完后即可关闭样本头温度制冷系统；冷冻箱温度调至—18度。

8)      切片手动手轮不用时立即锁定；

9)      切片结束后，应立即清理废物槽和抽吸软管后面的粗孔滤网内的切片残渣（注：抽吸软管请勿拿出冷冻室使用），滤网必须清洗干净（注：清洗时使用小水流冲洗，避免大水流损坏滤网）、晾干后即可安装到位。若滤网未装放入时应将抽吸软管接头放在旁边，切勿装入孔内。

10)     如果在使用之前仪器处于关机状态，需要提前5小时开机制冷，冷冻室温度降至—20度时，再打开样本头制冷系统。

Ø  请大家注意保持切片机使用完后冷冻室的清洁。

Ø  操作视频：仅供参考

https://www.bilibili.com/video/BV1Yg41177Fq?t=331.0