1 适用范围

Ø 所有管理人员及值班人员

2 生效日期

Ø 本SOP文件自2025年12月20日生效。

3 目的

Ø 规范细胞平台CO2、液氮管理维护时的操作规范。

4 职责

Ø 值班人员：认真执行本SOP的内容，并作好相关记录。

Ø 管理人员：培训、指导科研人员正确执行本SOP，同时需按本SOP对实验室进行定期维护并作好相应记录。

5 内容

5.1 CO2气瓶室维护细则：

Ø CO2气瓶室需保证通风状态，CO2气瓶罐应固定在气瓶架上。

Ø CO2气瓶室钥匙悬挂于细胞准备室UP纯水器旁围裙挂钩上（四楼），三楼楼挂于门控与鞋柜处。

Ø 每日检查CO2总压是否充足，低于2Mpa时需更换气瓶。注：CO2罐更换方案为同时开启两罐。

Ø 4楼CO2气瓶室更换气体瓶操作流程：

关闭：

①、关闭两个已使用完毕的CO2罐体阀门开关（顺时针为关），再关闭与气体瓶相连接的气路管道阀门（黑色钮开关，黑色钮末端与气路管道重叠为 “开”，与气路管道垂直为“关”）；

②、取下“正在使用”标识牌，挂上“空瓶”标识牌；

开启：

①、开启标记为“满瓶”的CO2气体罐，逆时针拧开罐体顶部的阀门总开关（正常条件下满瓶气体开启后，总压为5-7Mpa），接着开启气路管道与罐体连接的黑色阀门（黑色钮开关，黑色钮末端与气路管道重叠为 “开”，与气路管道垂直为“关”）；并拿下“满瓶”标识牌，挂上“正在使用”标识牌。

②、开启后，观察CO2气表显示值，总压值（冬天4.5mpa，夏天6.0mpa），分压值小于0.4mpa。无需调节气表压力。

③、特别提示：更换CO2罐时，只需操作气体罐顶部的阀门总开关及气道管道与气体瓶连接的黑色阀门开关，不必调整分压管道阀门及分压。

Ø 3楼CO2气瓶室更换气体瓶操作流程：

3楼CO2气瓶气路设计较4楼气瓶气路设计有较大差异。3楼气瓶气路只有一条主管道向净化室输送CO2气体，以主管道压气总表为界气路向上通向净化室，向下分左右气路由2个磁阀控制气体进入主管道，左右磁阀经管道各连接着3个气瓶。使用时，沿用4楼用气量设计，每个磁阀气路控制下启用2瓶，用完关闭气瓶，启用另一组磁阀气路控制下的2瓶。每组启用2气瓶后剩下的1瓶作为备用气体，气瓶将标注为“备用”。

关闭：

①、观察压力表总压读数，总压读数为0时，需要更换气瓶。首先关闭两个已使用完毕的CO2罐体阀门开关（顺时针为关），再关闭气体瓶与气路相连接的管道球阀阀门至“off”；

②、取下“正在使用”标识牌，挂上“空瓶”标识牌；

开启：

①、开启另一组磁阀控制下的两个满瓶CO2气体瓶，打开气瓶顶部阀门总开关（逆时针时针为开，一般满罐总压为5-7Mpa），接着开启气体瓶与气路相连接的管道球阀阀门至“on”；并拿下“满瓶”标识牌，挂上“正在使用”标识牌。

②、连接好气路后，需将气路指示球阀（即球阀的箭头方向）转到当前正在使用气路管道上。

③、气路完全开启后，观察CO2气表总压读数，总压值为（冬天4.5mpa，夏天6.0mpa）时，气路连通成功，气表压力无需任何调节。

Ø 更换气瓶时，如出现漏瓶等现象，请及时关闭该气瓶，并悬挂“异常”标识牌，拨打厂家电话反应情况，巡查表/值班表内记录下该情况，提醒下周二巡查/值班人员让工人处理该异常情况。

5.2 CO2培养箱维护细则：

Ø 正常运行时，CO2培养箱温度：37℃；CO2浓度：5%。

Ø CO2培养箱报警方式及处理：

A．单台培养箱温度和CO2浓度同时报警时，应观察箱门是否关严，观察温度和浓度是否有逐渐上升的趋势。（原因分析：箱门开启时间较久，温度和CO2流失，箱门关闭后自动缓慢恢复，该类情况以观察为主。）

B．单台培养箱CO2浓度异常报警，应检查室内靠墙壁处的减压阀是否正常，调节减压阀压力0.03-0.07Mpa即可。

C．多台培养箱CO2浓度同时报警时，应立即更换气瓶室CO2气瓶，更换流程见“5.1”。

5.3 液氮生物容器维护细则：

Ø 每日需检查液氮是否充足

Ø 检测工具为：液氮检查专用提子，其提竿上贴有白色医用胶布。

Ø 检查时使用带有标记的液氮提子轻触每个冻存罐内液面，看标记处的白色胶布位置是否高于该罐罐口，高于罐口则液氮充足；低于罐口则液氮欠缺，须从液氮储存罐（小口冻存罐）添加液氮到冻存罐（大小液氮灌均如此操作）。

Ø Therm大液氮罐需观察报警器是否正常运行。

5.4 周一巡查及值班人员职责

Ø 每周一检查气瓶室是否有CO2空瓶，以及“空瓶”数量，并向厂家预定周二送CO2气瓶的数量。

Ø 每周一须认真检查液氮罐内液氮量及储存罐内存储量，并确定向厂家预定周二的液氮量。（一般情况下为30L/60L每周间隔送，如上周30L液氮，这周60L液氮，依次类推。但具体情况结合当前检查液氮量确定。）

5.5 周二巡查及值班人员职责

Ø 每周二厂家送来CO2气瓶前，巡查/值班人员在早上确保电梯正常运行，并提前打开气瓶室防盗门。

Ø 协助工人更换气瓶，督促工人换好气瓶后手动检查连接正确、无漏气；确保气瓶无漏气等异常情况后，及时挂上“满瓶”标识牌，并签字确认收到的实际气瓶数量。

Ø 每周二厂家送来液氮，巡查/值班人员协助工人把液氮加进所有液氮罐（先细胞冻存罐再液氮储存罐），确保无遗漏，检查无渗漏后盖好盖子（如遇液氮添加过多，盖子无法盖严时，应手动转移多余液氮至储存罐），并签字确认收到的实际液氮量。

5.6 CO2泄露事故应急处理方案

Ø 发现泄露，及时关闭气瓶总阀门，开启栅栏门及附近窗户。

Ø 立刻上报实验室安全岗。

Ø 疏散人群。如有CO2中毒症状，及时安置于空气畅通区并及时送医。

Ø 安全管理员勘察现场，及时处理，可采用风机实施吹散CO2。