IX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP_XBGL.10.010.140420
1 适用范围
Ø 所有科研人员及管理人员
2 生效日期
Ø 本SOP文件自2014年4月20日生效，原SOP文件《10.010.02.OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP》停止执行。
3 目的
Ø 规范细胞室OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜操作规程
4 职责
Ø 科研人员：认真执行本SOP的内容，并作好相关记录。
Ø 管理人员：培训、指导科研人员正确执行本SOP，同时需按本SOP对设备进行定期维护保养并作好相应记录。
5 内容
5.1 主要性能参数
| 显微镜镜体 |
物镜转换器 |
六孔，带有简易防水装置 |
| 聚焦 |
行程9mm（从载物台表面起，向上7mm，向下2mm），同轴粗/微调节钮（微调精度1μm，微调每圈行程100μm），上限位锁定机构，粗调扭力矩调节器 |
| 初始图像光口 |
上光口，更换内置1×/1.6×变倍器 |
| 前置操作 |
光路选择钮，透射光强调节钮和灯开关，TTL脉冲控制钮。 |
| 透射光照明器 |
100W透射光照明柱 |
IX2-ILL100 |
照明支柱倾斜装置（30度倾角，带有减震装置）；聚光镜架（行程50mm，带有摆动装置）；可调视场光阑，4个滤色片架（直径45毫米，厚度=6mm或更小） |
| 外接电源装置 |
TH4-200 |
200V，TH4-HS手动控制器，重量2.2kg |
| 观察筒 |
双目观察筒 |
U-BI90 |
瞳间距调焦范围：50～76mm，带有屈光度调节功能，视场数22 |
| 载物台 |
右手控制旋钮载物台 |
IX2-SFR |
行程：50mm（X）×50mm（Y），载物台插入板可更换（直径110mm） |
| 聚光镜 |
长工作距离聚光镜 |
IX2-LWUCD |
5孔转盘（其中3孔直径30mm，2孔直径38mm），孔径光阑可调，N.A.0.55， W.D.27mm |
| 目镜 |
WHN10×-H |
高眼点，带屈光度调节功能，视场数22 |
| 反射光荧光装置 |
荧光照明器 |
IX2-RFA |
直型设计，带有视场光阑模块，有滤色片滑板（2个位置，直径32mm，厚度或更小） |
| 荧光滤色镜转盘 |
IX2-RFAC |
转盘上有6个位置，内置光闸 |
| 光源 |
100W汞灯室和变压器 |
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5.2 主要应用范围
Ø 透射光明场、透射光相差、反射光荧光显微观察
5.3 操作流程
5.3.1 将光强调节钮调节到最小；
5.3.2 打开显微镜电源，将主开关拨到“I”（开）；
5.3.3 荧光观察时，开荧光汞灯光源，将主开关拨到“I”（开）；
Ø 汞灯是高压激发，其内是高压，切忌频繁开关，可能的话，需观察的样本请集中在一个时间段观察，在开灯10~15分钟后开始观察效果较好。
Ø 注意：开灯后15分钟内勿关，最好25~30分钟再关闭。
Ø 关闭高压汞灯后，要再次启动，必须等高压汞灯内的水银蒸气冷却下来液化后，才能开启，关灯后再开灯的间隔时间至少为10分钟，最好为20min以上。
Ø 荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用SHUTTER而不要关闭电源。
Ø 当电源上的计时器到200小时以后，汞灯可能出现不稳定，如开电源后需要很长时间灯才亮，或者观察时发现光线忽然强忽然弱，这时需要更换汞灯。请通知管理人员。
5.3.4 转动荧光分光镜组件转盘选择光路。
Ø 透射光观察时，转动未装激发块的荧光转盘部位进入光路，使透射光接入光路。
Ø 根据样品的荧光指示剂选择与之匹配的荧光组件（荧光转盘）。荧光转盘的选择：在物镜下方的荧光转盘里装有不同的滤色块，对应的标记在机架前方可以看见，针对不一样的荧光染料选用不一样的滤色镜块。NIBA：蓝色激发/绿色荧光（例：FITC、EGFP等）；WIG ：绿色激发/红色荧光（例：Rhodamine、DsRed等）。
5.3.5 选择放大倍率，拉出变倍钮放大倍率1.6X，推进变倍钮放大倍率为1X。
5.3.6 选择滤色片：
Ø 在出光口有4个滤色片，包括2个光强调节滤色片（ND25/6，透过率25%/6%），1个绿色单色反差滤色片，1个毛玻璃，其中毛玻璃一直选用，当光强比较强的时候，可以选择不同的光强调节滤色片来减弱，在做相差观察的时候可以选择绿色滤色片（可以增加反差效果）。
Ø 荧光观察时，使用高倍物镜长时间观察，会发生荧光衰减，导致荧光图像反差减弱，这时可以选择ND滤色片减少激发光强（本机现在无配备）。
5.3.7 光路转换，用相差环选择（观察）光路。做明场观察的时候选用BF（旋转转盘来选择），在做相差观察的时候，低倍物镜选择PHL，10~20倍的时候选择PH1，40倍选择PH2。
5.3.8 利用X轴Y轴调节钮调节样品位置；
5.3.9 调节物镜转换器选择放大倍数；
5.3.10 样品聚焦：
Ø 调节粗/微调焦旋钮
Ø 调节光强调节钮
Ø 调节双目观察筒
Ø 调节瞳间距
Ø 调节屈光度。转动左目镜筒上的屈光度调节环，直到视场周边区域清晰可见。
5.3.11 调节视场光阑。左右拨动视场光阑杆，关闭或打开视场光阑，“O”（开）。
Ø 视场光阑用于根据所用物镜调节照明光束直径。为了屏蔽散射光，获得良好的图像反差，请将视场光阑调节于外切于视场。观察活细胞或荧光样品时，为了防止样品损伤或褪色，关小视场光阑是有效的。
5.3.12 调节孔径光阑。孔径光阑可调节观察图像的亮度、对比度、反差和分辨率。
Ø 一般来说，对于染色样品，将孔径光阑调节到物镜数值孔径的70％-80％时，可能是最佳观察位置。
Ø 对于不染色细菌样品，根据需要，将孔径光阑向关方向转动。
5.3.13 关机
Ø 先将将光强调节钮调节到最小，再将显微镜主电源开关拨到“O”（关）。
Ø 荧光观察时，关荧光汞灯光源，将主开关拨到“O”（关）；
Ø 注意：开灯后15分钟内勿关，最好25~30分钟再关闭。
Ø 荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用SHUTTER而不要关闭电源。
Ø 等待仪器（尤其是光源部分：汞灯、卤素灯）冷却后再盖上防尘罩。
5.4 注意事项
5.4.1 使用完显微镜时，一定要把主开关拨到“O”（关）。
5.4.2 明场相差观察时，请不要开荧光电源，荧光观察后请在登记本上记录荧光电源使用时间。
5.4.3 荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用SHUTTER而不要关闭电源。
5.4.4 开/关显微镜电源前，请首先将亮度开关调至最低。
5.4.5 在做荧光观察的时候，在观察筒前方的咖啡色挡板请不要拆下，以防在做紫外观察的时候被紫外线灼伤。而且咖啡色遮光板能够将部分激发光遮住，只留必要数量的激发光，能够起到减少激发光强度的作用。
6 维护保养
6.1 显微镜避免直射、高温、高湿、多尘。
6.2 使用完毕，等待仪器（尤其是光源部分：汞灯、卤素灯）冷却后再盖上防尘罩。
6.3 本室显微镜为专人定期维护，请不要随意用酒精等有机溶剂擦拭仪器部件，如有杂物可以用吸耳球吹净。如果外露光学部分如目镜、物镜和聚光镜被灰尘等污染，需要用擦镜液（酒精30％：乙醚70％）擦拭干净。塑料表面勿用酒精乙醚混合液，镜片表面禁用干镜头纸擦拭。
6.4 物镜不可随意拆卸，且防震防摔。
6.5 使用完显微镜后，请将各功能部件复位。
6.6 为了保护汞灯、延长其使用寿命，其开、关间隔时间最好不要少于30分钟。汞灯关闭后，如果需要重新开机，必须等约20分钟汞灯冷却后，再打开汞灯电源。
6.7 不要用手强行扳动显微镜电动部件，调节显微镜手动部件时，用力要轻，遇到阻力时不要强行调节。
6.8 尽量不要用手直接触摸显微镜光学部件（如目镜、物镜、聚光镜等的镜面）。
6.9 荧光观察时，使用高强度的激发光，样品的荧光容易发生衰减，首先应使用ND滤色片以减少激发光的强度，如果没有ND滤色片，就减小孔径光阑，也可以起到相同的作用。但是不要把孔径光阑关得太小，不要把孔径光阑当作光阑使用。
7 示意图
