1 适用范围

Ø 本SOP适用于FastPrep 24 5G匀浆仪使用与注意事项。

2 生效日期

Ø 本SOP文件自2018年3月14日生效

3 匀浆仪的操作

3.1 在使用匀浆仪之前应明确：

Ø 本仪器除用于对人、动物及植物组织，细菌、酵母、真菌、土壤等的溶解、研磨、均质化外，不得用于其他用途。

3.2 开机

Ø 打开仪器背后绿色开关通电。

Ø 注意：开机前需确保 “紧急制动按钮”（ 红色旋钮）处于释放状态，当“紧急制动按钮”处于被占用状态时，仪器将无法运行。

Ø 屏幕正面点亮后进入主界面。

3.3 开盖

Ø 点击“Home Screen”四个选项的任意一个。

Ø 点击“open”打开透明盖。

3.4 样品的装配和固定

Ø 按程序中的提示添加样本，并加入缓冲液或者裂解液、裂解介质于对应裂解管，即可装载适配器。

Ø 逆时针方向旋松适配器上的白色盖子，插入管子，将压盖支架向左转动，当适配器主支架上的白色条子位于卡窗最左侧时，可见压盖支架都刚好位于管盖上方即可。顺时针旋紧白色盖子，听到清脆的咔咔咔两三声即可。

Ø 注意：使用该样品架时可装配的最大样品量为24支2mL 离心管。

Ø 注意：加入裂解介质的量应不超过裂解管的1/3，加入的液体量应不超过裂解管刻度线。

Ø 注意：装载样品架时尽量保证平衡。

Ø 注意：科研中心提供的裂解介质为1mm钢珠，在保证洗干净的前提下可以二次利用，但是清洗时不能用盐浸泡，以防腐蚀。

3.5 关盖

Ø 双手成60°压下透明盖，听到咔即可，此时无法手动打开透明盖。

Ø 注意：圆形透明盖为电动机械锁装置，当发生断电或者需要手动打开透明盖时，拉开仪器背面的白色拉杆即可开盖。

Ø 注意：若发生适配器未旋好，或液体飞溅，请敲击主机前面的红色旋钮紧急停止，再通过仪器背面拉杆打开盖子。

Ø 需要恢复电源时，顺时针旋转红色紧急制动旋钮。

3.6 程序的选择与设置

3.6.1 选择预设程序

Ø 点击“Recommended Programs”进入工厂预设程序，里面含有常见动植物细菌等的程序，程序中含有适用的裂解介质管型号，振动的幅度，振动时间，所需样本上样量，循环次数及等待时间等。

Ø 当选择好适合程序直接点击“RUN”，并在随后出现的提示界面点击“YES”确认开始运行，屏幕出现倒计时界面。

Ø 运行过程中随时可点击“STOP”中止。

Ø 程序运行结束后，屏幕显示“ASSAY COMPLETED SUCCESSFULLY”。

Ø 点击“OPEN”打开圆形透明盖，取出样品。

Ø 点击“REPEAT”再次运行相同程序。

Ø 点击“OK”回到主界面。

Ø 注意：“Recommended Programs” 仅供查看参数用，不可编辑。

3.6.2 手动设置程序

Ø 若要手动设置程序，请在主界面点击“Program Manually”，手动设置裂解介质管型号，振动的幅度（速度范围4-6.5m/s，一般6.0m/s即可，若希望力度小可适度减小，若希望力度大可适度加大），振动时间（一般30s即可，根据破碎情况增减），所需样本上样量（一般为50mg-100mg），循环次数及等待时间（一般为5min）等；若需更换适配器，请在adpater处修改其相应型号。

Ø 参数设置完成后，点击“RUN”，并在随后出现的提示界面点击“YES”确认开始运行，屏幕出现倒计时界面。

Ø 程序运行结束后，屏幕显示“ASSAY COMPLETED SUCCESSFULLY”。

Ø 保存程序：参数设置完成后，点击“SAVE”，使用自动生成的按键输入程序名称。

Ø 点击“ENTER”，并在随后出现的询问界面点击“YES”保存已命名的程序。屏幕显示“？ASSAY NAME? SAVED SUCCESSFULLY”表明程序保存成功。

Ø 最多只可保存12个程序。

Ø 点击“OPEN”打开圆形透明盖，取出样品。

Ø 点击“REPEAT”再次运行相同程序。

Ø 点击“SAVE”保存程序。

Ø 点击“OK”回到主界面。

Ø 手动设置的程序保存后可以在“SAVED PROGRAMS”里面打开直接调用。

Ø 在设定参数时，可长按箭头以快速增大或减小设定值。

Ø 注意：速度设定不可超过6.5 m/s。

Ø 程序保存后将不可被编辑。

Ø 注意：虽然仪器运行时间可达120 s，但建议对任何超过60 s的运行都进行严密监控。某些裂解介质在高速下振动60 s会产生高温甚至可能导致爆管。

3.6.3 删除程序

Ø 在主界面点击“SAVED PROGRAMS”。

Ø 选择要删除的程序名称，点击“DELETE”，在询问界面点击“YES”确认删除。

Ø 屏幕显示“？ASSAY NAME? DELECTED SUCCESSFULLY”表明程序删除完成。

3.7 在运行时终止程序

Ø 在运行过程中可根据需求终止运行。点击“STOP”，屏幕出现询问界面“ARE YOU SURE YOU WANT TO ABORT ASSAY”，点击“YES”选择终止实验，点击“NO”回到先前界面。

Ø 当选择终止实验后，在随即出现的确认界面“SESSION IS ABORTED”，点击“YES”回到主菜单，点击“OPEN”即开盖。

3.8 破碎完成后，旋松白色盖子取出管子，盖上透明盖子，关掉仪器背后电源即可。

4 注意事项：

Ø 若发生适配器未旋好，或液体飞溅，请敲击主机前面的红色旋钮紧急停止，再通过仪器背面拉杆打开盖子。

Ø 若仪器中有水在转子下面的白色托盘内，请用纸擦干；若溶剂溢出，请先用脱脂棉沾取无水乙醇擦拭，再用水擦拭，最好用纸擦干。

Ø 若需要反复破碎几次，建议在等待时间内，将适配器连管子一起取下放冰盒或4摄氏度冰箱，下次循环开始前再装入仪器。

Ø 请不要在管盖上做标记，尽量标记在管子侧面。

Ø Coolprep适配器中，仅加干冰50g以内即可，不可加水质冰和液氮。

附： 裂解介质简介

Ø 大小

研磨颗粒越小，得到的样本颗粒越小。研磨后得到的样本颗粒直径小于研磨颗粒。因此， 请根据您希望得到的样本颗粒的大小来选择裂解珠。例如，如果您想得到完整有功能的细胞器， 最好选择一个大一点的裂解介质。用较小的裂解介质有利于获得更小的结构体，如病毒粒子和芽孢。

Ø 形状

裂解介质的形状是决定裂解后样本组分形态的重要因素。诸如球体等钝的裂解介质，主要依靠碰撞力来裂解样本；而锋利的裂解介质主要依靠剪切力来裂解样本。剪切力更有利于打开难裂解的样本，适用于需要分离诸如DNA等稳定的分子成分。

RNA和一些特定的易降解的蛋白质易受到剪切力的破坏，而其他分子物质，如DNA，稳定的蛋白质（如抗体和胶原蛋白），多糖结构，小分子物质（例如小的次级代谢产物）对剪切力免疫，因此剪切力在分离上述物质和需要剪切功能时很实用。

裂解介质	简介	样本类型
裂解介质A	含石榴石和1/4英寸的氧化锆珠。介质的锋利性、棱角和不规则的表面使得裂解非常高效（强烈）。可用于高效分离DNA，慎用于RNA和蛋白质。	坚硬和难磨的样本：动物， 细菌， 酵母， 真菌，   植物。
裂解介质B	含0.1mm硅珠。	细菌（革兰氏阳性、阴性菌），孢子。
裂解介质C	含1mm硅珠。	酵母和酵母孢子，真菌和真菌孢子，藻类
裂解介质D	1.4mm陶瓷珠。	较软的动物组织：脑、肝脏、肾脏、肺、脾等。 植物组织：如叶、根、果实。 培养的细胞、整个昆虫。
裂解介质E	含1.4mm 陶瓷珠，0.1mm硅珠和一个4mm玻璃珠的管子。可用于从肿瘤组织或者其他疑难样本中提取RNA。	土壤，粪便，环境水，废水，泥浆。
裂解介质F	含1.6mm氧化铝颗粒和1.6mm碳化硅颗粒。 高碰撞力低剪切力，裂解粗糙、坚硬、脆的细胞膜十分有效，可用于分离完整的细胞器，超分子结构等。提取RNA、蛋白质时，应用于使用A 管太过剧烈的样本。	动植物组织，细菌，霉菌，真菌，珊瑚乳液，固定的样本。
裂解介质G	含1.6mm碳化硅颗粒和2mm玻璃珠。 高碰撞力低剪切力，裂解粗糙、坚硬、脆的细胞膜十分有效，可用于分离完整的细胞器，超分子结构等。	脆性细胞壁的植物和动物组织，酵母，真菌（含孢子）
裂解介质H	含2mm玻璃珠和2mm黄色氧化锆珠。 可以有效的裂解非常坚硬的组织，适合于分离完整的细胞器和超分子结构。	动植物组织，木材，种子，致密的土壤和沙土，菌落， 整个昆虫，蜱，古老和干燥的样本
裂解介质I	含2mm氧化锆珠和4mm黑色陶瓷珠。 可以有效的裂解非常坚硬的组织，适合于分离完整的细胞器和超分子结构。	动植物组织，木材，种子，致密的土壤和粘土，整只昆虫， 蜱，古老干燥的样本，干磨真菌孢子，铁锈
裂解介质J	含2mm黄色氧化锆珠和1 . 6mm氧化铝珠。	动植物组织，细菌（革兰氏阳性或者阴性菌），真菌，珊瑚乳液，固定的样本，干磨真菌孢子，铁锈
裂解介质K	含0. 8mm的硅酸锆珠。	无活性的组织，骨头，保存的样本，动物副产品，真菌， 酵母孢子.
裂解介质M	含1/4英寸（6.35mm）的氧化锆珠。 化学惰性强， 不与任何核酸物质结合。适用于从疑难样本中提取R N A 。	所有样本，艰难的样本，骨骼肌，肺，心脏，骨头，种子， 孢子
裂解介质S	含1/8英寸（3.175mm）直径的不锈钢珠。 用来打碎坚硬、脆的组织。用于从疑难样品中提取R N A 和蛋白质。	所有样本，艰难组织，骨骼肌，肺，心脏，骨头，种子，孢子。
裂解介质SS	含1 / 4 英寸（6.35 mm）不锈钢研磨珠。 用来研磨坚硬、脆的组织，用于从疑难样本中提取R N A 。	所有样本，艰难组织，骨骼肌，肺，心脏，骨头，种子，孢子。
裂解介质Y	含0.5mm钇稳定氧化锆珠。这些珠子非常致密坚硬，因此适合裂解艰难的细胞壁。	所有样本，坚硬的组织，骨骼肌，肺，心脏，骨骼，种子，孢子。
裂解介质Z	含2.0mm钇稳定氧化锆珠。这些珠子非常致密因此可以用来裂解非常艰难的细胞壁，同时它光滑的外表面减少剪切。 （Z可以用来替代A来提取艰难组织中的RNA和蛋白质。）	动植物组织，木头，种子，非常致密的土壤和粘土，细菌，整只 昆虫，蜱，古老和脱水的组织